PENUNTUN PRAKTIKUM BIOKIMIA 
                           
                           
          
          
          
          
          
          
          
                           
          
          
                           
                  Program Studi Pendidikan Kimia 
               Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam 
                   Universitas Pendidikan Ganesha 
                                 Penuntun Praktikum Biokimia  
                                                      PERCOBAAN I 
                                                 REAKSI UJI ASAM AMINO 
                    Pendahuluan 
                           Asam amino merupakan molekul organik dengan masa molekul rendah (antara 100-
                    200 Da) yang mengandung setidak-tidaknya satu gugus karboksil (-COOH) dan satu gugus 
                    amino (-NH2). Asam amino ini merupakan komponen penting untuk biosintesis protein. 
                    Dalam protein terdapat sekitar 20 jenis asam amino standar. Semuanya merupakan asam -
                    amino, kecuali prolin dan hidroksi prolin. Variasi yang terjadi antara asam-asam amino 
                    terletak  pada  gugus  R atau rantai sampingnya (Gambar 1.1). Berdasarkan gugus R-nya 
                    akan  dapat  diramalkan  sifat-sifat  suatu  asam  amino.  Sebaliknya,  berdasarkan  sifat-sifat 
                    yang teridentifikasi  akan  dapat  diketahui  gugus  R  yang  terkandung  dalam  asam  amino 
                    tersebut  atau akan diketahui jenis asam aminonya. 
                                                            R
                                                   H               O
                                 Gugus -amino H N C C O H Gugus -karboksil
                                                            H                                   
                    Gambar 1.1 Struktur Asam -amino. Bagian asam amino yang ditunjukkan dalam kotak 
                                 merupakan bagian yang umum untuk semua asam -amino. Gugus R yang 
                                 mewakili rantai samping memiliki struktur yang berbeda untuk setiap asam 
                                 amino.  Gugus  karboksil  dan  gugus  amino  dapat  dimanfaatkan  untuk 
                                 menganalisa  suatu  asam  amino  secara  umum  dalam  campuran.  Gugus  R 
                                 dimanfaatkan dalam menganalisa asam amino secara spesifik. 
                           Berdasarkan  strukturnya,  asam  amino  diklasifikasikan  menjadi  tujuh  kelompok 
                    (Tabel 1.1). Klasifikasi ini didasarkan pada sifat kimia dari gugus R-nya sehingga akan 
                    memudahkan  dalam  mengingat  sifat-sifat  umum  dari  setiap  asam  amino.  Dengan 
                    klasifikasi  ini,  akan  dapat  dirancang  metode  untuk  analisa  suatu  asam  amino  tertentu 
                    (Tabel 1.2). 
                                Tabel 1.1 Klasifikasi Asam Amino Berdasarkan Struktur Kimianya 
                                             Sifat Gugus R      Contoh Asam Amino 
                                          Alifatik              Gly, Ala, Val, Leu, ILe 
                                          Aromatik              Phe, Tyr, Trp 
                                          Hidrosiklik           Ser, Thr 
                                          Karboksiklik          Asp, Glu 
                                                                             Penuntun Praktikum Biokimia  
                                                Mengandung sulfur        Cys, Met 
                                                Imino                    Pro, Hyp 
                                                Amino                    Lys, Arg 
                                                Amida                    Asn, Gln 
                            Tabel 1.2 Beberapa Reaksi untuk Mendeteksi Asam Amino Berdasarkan Gugus R 
                              Reaksi uji                      Reaksi/reagen                Asam Amino yang  Warna 
                                                                                                Dideteksi 
                        Reaksi Millon             HgNO  dalam asam nitrat dengan           Tirosin                 Merah 
                                                         3
                                                  sedikit asam nitrit 
                        Reaksi                    Pendidihan dalam asam nitrat             Tirosin, triptofan,     Kuning 
                        Xanthoprotein                                                      fenilalanin 
                        Reaksi Hopkins-           Asam glioksilat dalam H SO               Triptofan               Ungu 
                                                                             2    4
                        Cole                      pekat 
                        Reaksi Sakaguci           -naftol dan natrium hipoklorit          Arginin                 Merah 
                        Reaksi Nitroprusida       Natrium nitroprusida dalam NH            Sistein                 Merah 
                                                                                     3
                                                  encer 
                        Reaksi Pauli              Asam sulfanilat terdiazotasi dalam       Histidin dan            Merah 
                                                  larutan basa                             tirosin 
                        Reaksi Folin-             Asam fosfomolibdat                       Tirosin                 Biru 
                        Ciocalteu 
                       1.1 Uji Millon 
                               Reagen  yang  digunakan  dalam  uji  Millon  adalah  larutan  ion  merkuri  dan  ion 
                       merkuro dalam asam nitrat dan asam nitrit. Warna merah yang terbentuk adalah garam 
                       merkuri dari tirosin yang ternitrasi. 
                       Percobaan  
                       Alat : 
                          Pipet tetes dan tabung reaksi 
                       Reagen dan bahan :  
                          Reagen Millon (larutan 10 g merkuri dalam 20 mL asam nitrat pekat kemudian encerkan 
                              dengan 60 mL air), 
                          Larutan protein (buat larutan albumin telur (1:5)), 
                          Larutan asam amino 1 %  (tirosin, fenilalanin, triptofan, glisin). 
                       Prosedur :  
                                                                                        Penuntun Praktikum Biokimia  
                   Tambahkan 5 tetes reagen Millon ke dalam 3 mL larutan protein, panaskan campuran 
                   baik-baik. Jika reagen yang digunakan terlalu banyak, warna akan hilang. Hal yang sama 
                   juga dilakukan terhadap larutan asam-asam amino. 
                 Pertanyaan 
                   a. Apa yang terjadi jika garam merkuri ditambahkan ke dalam larutan protein? 
                   b. Mengapa larutan albumin teragulasi? 
                   c. Asam amino mana yang menunjukkan uji positif? Mengapa? 
                  
                 1.2 Uji Hopkins-Cole 
                       Reaksi yang terjadi pada uji Hopkins-Cole adalah triptofan berkondensasi dengan 
                 aldehid dari asam glioksilat dalam suasana asam sulfat membentuk kompleks berwarna 
                 (Gambar 1.2). 
                                                    H    H H
                                                             COOH
                                                 N           NH
                                                 H H     H
                                                                    
                             Gambar 1.2 Asam 2,3,4,5-tetrahidro--karbolin-4-karboksilat 
                 Percobaan  
                 Alat : 
                   Pipet tetes dan tabung reaksi 
                 Reagen dan bahan : 
                   Reagen Hopkins-Cole (asam glioksilat), 
                   HSO pekat, 
                     2  4
                   Larutan protein [buat larutan albumin telur (1:5)], 
                   Larutan asam amino  1 %  (tirosin, fenilalanin, triptofan, glisin). 
                 Prosedur : 
                   Ke dalam 2 mL larutan protein ditambahkan 2 mL reagen Hopkins-Cole. Tambahkan 
                   sedikit  demi  sedikit  H SO   pekat  sampai kira-kira 5 mL melalui sisi tabung. Amati 
                                      2  4
                   warna yang terbentuk pada pertemuan kedua cairan. Bila perlu putar perlahan-lahan 
                                                                Penuntun Praktikum Biokimia